华体会网页版的黑皮肤系统由正常皮肤组成, 人源性表皮角质形成细胞(NHEK)和黑色素细胞(NHM)培养形成多层次, 高度分化的人类表皮模型. 共培养中的NHM进行黑色素生成，导致组织色素沉着. 黑素真皮是使用无血清培养基生产的，不含人工黑色素生成刺激物，如TPA和IBMX. 培养物在气液界面的组织培养插入物上生长, 允许局部应用皮肤光亮剂或自黑剂. 黑素皮肤提供了一个有用的体外手段，以评估化妆品和药物制剂的设计，以调节皮肤色素沉着.
黑皮类动物具有体内样形态和超微结构特征，具有一致性和高度可重复性. 定位于黑素真皮基底细胞层的NHM是树突状的，自发产生黑色素颗粒，并逐步填充组织层. 培养3周后, 黑素皮肤组织色素沉着，保持正常的上皮形态. Tissues containing NHM derived from black donors show increased pigmentation versus those containing Caucasian-derived or Asian-derived NHM; all three types of cultures are distinctly darker than NHM-free tissues (表皮TM). 局部应用已知的抑制剂的黑色素生成显著减少黑色素的生产和宏观暗变. 相反, 组织内的NHM会对已知的黑色素生成刺激物做出反应, 如α-黑素细胞刺激激素和β-成纤维细胞生长因子, 产生比未处理组变黑更快的组织. 近20年来，黑种人的直接分析已被纳入实验室的整体测试策略. 有几十个可用的技术参考, 越来越多的数据表明，黑素皮肤为评估皮肤色素沉着提供了一种廉价而有效的方法，同时避免了物种外推和使用实验动物.
黑素真皮为评估皮肤色素沉着提供了一种廉价而有效的方法，同时避免了物种外推和使用实验动物. 简单的协议和对早期细胞终点的评估使科学家能够在几天内获取数据, 而不是几周或几个月.
皮肤亮
使用可溶性™黑色素分析进行定量测定，以确定组织中的黑色素含量. 本实验可用于测试最终化妆品配方的美白效果.
色素的研究
黑素真皮已被用于研究皮肤色素沉着的生理机制.
组织:
工具: 标准的黑种人™试剂盒(MEL-300)由24个组织组成，每个组织直径9毫米. (组织“套件”包含组织, 少量培养基:少量培养基, and plasticware; contact 华体会网页版 for specific kit contents.)
基质: 使用化学改性，胶原蛋白涂层，9毫米ID单孔组织培养板插入物.
文化:在气液界面.
播种率: NHM:这些地方= 1/10. 可根据要求提供1/30的比例.
组织学: 8-12层细胞(基底层、棘层和颗粒层).
角质层: 10-15层(TEM).
很多数字: 每个技术员每周生产的组织批次被分配一个特定的批号. 通常，任何一周的组织生产都有多个批号. 一个字母被附加在批号的末尾，以区分在给定的许多组织中的单个试剂盒. 所有的组织套件在细胞方面都是相同的, medium, 处理, 培养条件, 等.
装运: 在4°C的培养基补充，琼脂糖凝胶在24孔板.
装运: 每星期一. 如有特殊要求，星期四装运也可以.
交付: 周二上午通过联邦快递优先服务(美国). 美国以外:周二至周三，取决于地点.
保质期: 包括运输时间在内，组织可在使用前在4°C保存6天. 但是，除非必要，否则不建议延长储存期. 除了, 如果组织在同一天连续使用，可获得最好的重现性, e.g. 星期二下午或之后在4°C存放过夜(星期三上午).
长度的实验: 培养至少可持续2周，正常表皮形态保持良好. 培养物必须每隔一天喂5次.0毫升新维护介质(EPI-100-NMM-3)或epi - 100 nmm - 113. 细胞培养插入物被放置在顶部板(HNG-TOP-12，提供)，以允许使用5.0 mL.
替代组织:
MEL-300-A(或-B或-C)-EACH: 和MEL-300一样，只是只有一个组织，不是24个组织.
MEL-300-A(或-B或-C) -FRZN-EA: 经过3次冻融循环的MEL-300-B组织. 旨在作为黑色素试验的对照.
Mel-301 (-a， -b， -c): 培养3 d时低于MEL-300，分化程度低于MEL-300
Mel-312 (-a， -b， -c): 与MEL-300 (-A， -B， -C)相同，只是每个试剂盒有12张纸巾，而不是24张.
Mel-606 (-a， -b， -c): 同MEL-300 (a, -B, -C)除了每包6张纸巾, 每个组织在直径更大的细胞培养皿中培养(ID = 22 mm).
mel -300英尺(-a， -b， -c): Full-thickness human skin tissue model composed of fibroblast-containing collagen matrix (dermis); normal human epidermal keratinocytes, 和正常的人类黑色素细胞(表皮). 每包24张纸巾.
细胞:
类型: a) Normal human epidermal keratinocytes (NHEK); b) Normal human melanocytes (NHM).
基因组成: NHEK和NHM来自不同的捐赠者. 含有匹配的NHEK和NHM的组织可根据特殊要求提供.
民族起源: 含NHM的白种人黑色素(MEL-300-C), 非裔美国人(梅尔- 300 b), 以及亚洲(MEL-300-A)捐赠者.
来自: Neonatal-foreskin组织.
选择: 数量有限的NHEK菌株 & NHM取自成人乳房组织.
筛选: 艾滋病毒，乙型肝炎和丙型肝炎.
介质:
基础培养基: 杜尔贝科改良鹰型介质(DMEM).
生长因子/激素: 表皮生长因子, 胰岛素, 氢化可的松, 和其他刺激表皮分化的药物.
血清: 没有一个.
抗生素: 庆大霉素5µg/mL(庆大霉素正常水平的10%).
抗真菌剂: 两性霉素B 0.25µg / mL.
酸碱指示剂: 酚红.
其他添加剂: 用于增强表皮屏障形成的脂质前体(专利).
选择: 苯酚red-free(梅尔- 300 b -脉冲重复频率), 不需抗生素(梅尔- 300 b -沛富), anti-fungal-free(梅尔- 300 b -等于off), 和无氢化可的松培养基和组织(MEL-300-B-HCF)是可用的. 代理商至少在装运前3天被移除.
维护中: 推荐使用三种维护介质.
用于长期实验，其中色素沉着和组织学是重要的, 使用EPI-100-NMM-3, epi - 100 nmm - 113, 推荐使用epi - 100 - llmm - 3所示.
EPI-100-NMM-3 (New Maintenance Medium)含有保留组织学的KGF，但不包含任何直接促进色素沉着的因素.
epi - 100 nmm包含KGF - 113, βfgf, α-MSH和α-MSH，促进色素沉着和组织学保留.
长寿命维护中, epi - 100 - llmm - 3所示, 含有高水平的α-MSH和βfgf, 也含有与EPI-100-NMM-3和EPI-100-NNM-113相同水平的KGF. 组织在LLMM-3中变暗最快，在NMM-113中变暗慢，在NMM-3中变暗慢.
在培养物中加入5，组织学保留效果最好.每48小时注入0毫升培养基.
质量控制和无菌:
目视检查: 所有组织都要进行目视检查，如果发现了物理缺陷, 组织被拒绝装运. 对选定的组织进行显微镜检查，以确保可以看到黑色素细胞(MEL-300-B和MEL-300-A组织)，并确保它们均匀分布在整个组织中.
最终用途测试: 组织继续培养，以确保组织出现肉眼变暗. 组织暴露于1% Triton X-100 5小时. 根据MTT试验(见华体会网页版表皮™ET-50协议)，每批组织的5小时存活率必须超过35%.
不育: 在整个生产过程中使用的所有培养基都要进行无菌检查. 维持培养基加抗生素和不加抗生素孵育1周，检查无菌情况. 来自24孔板的用于运输的琼脂糖凝胶也被培养1周，并检查任何污染的迹象.
筛查病原体: 对所有细胞进行筛选，并使用PCR检测艾滋病毒、乙型肝炎和丙型肝炎均为阴性. 然而，没有任何已知的测试方法可以完全保证这些细胞是无病原体的. 因此, 这些产品和所有人类源性产品应按照CDC-NIH手册建议的BSL-2级别(生物安全级别2)或更高级别进行处理, "微生物和生物医学实验室的生物安全,” 1998. 如需进一步协助，请联系您的现场安全主任或华体会网页版技术服务.
批不合格通知书: 如果组织批次没有通过我们的质量控制或无菌测试, 顾客会得到通知，并在适当的时候免费更换纸巾. 因为我们的QC和无菌检测是在出货后进行的, 通知会尽快发出(一般情况下, %可行性故障将于周三下午5点前通知.m.; sterility failures will be notified within 8 days of shipment).
